答：大部分文献的亚细胞定位载体一般都是把目标蛋白连在N端，GFP放在C端；如果目标蛋白连在C端，在加工过程中有可能信号肽 会连同GFP一起被切掉 ，导致荧光淬灭，或荧光信号弱。也有少部分目标蛋白必须连在C端才有信号。极少的目标蛋白需要连入GFP中间才有信号。融合在荧光蛋白N端的目标蛋白一般无法得到过氧化物酶体的定位结果，融合在荧光蛋白C端的目标蛋白一般无法得到线粒体、质体的定位结果。选择融合位置时需考虑蛋白质的性质和功能，有时可能需要尝试两种方式以确定最佳融合位点。