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如何确保BiFC实验中检测到的荧光信号反映的是真实的蛋白质相互作用?
2025/3/11
答:为了确保BiFC实验荧光信号的真实性,需要排除假阳性的可能性。假阳性可能是由于荧光蛋白片段的非特异性相互作用或其他非目标蛋白质之间的相互作用引起的。因此,在实验中应设置对照组,如单独表达荧光蛋白片段或目标蛋白的对照组,以排除非特异性相互作用的干扰。也可重复实验,保持每次实验条件(如细胞类型、培养条件、成像参数等)的一致性,比较蛋白质相互作用结果是否一致;此外,还可以结合其他实验方法,如免疫共沉淀(Co-IP)、酵母双杂交(Y2H)、GST pull-down和荧光素酶蛋白互补实验(LCA)等,以多角度、多层次地验证蛋白质相互作用的真实存在。